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四、在丹陽最終分離到姬鼠型出血熱病毒
誰將成為我們的合作伙伴，這是經(jīng)過一番選擇的。江蘇省的裘學(xué)昭大夫為人正直，工作積極肯干，學(xué)術(shù)上又有很高造詣，在省站病毒學(xué)方面又是數(shù)一數(shù)二人物，說話有分量。她與同事及下屬單位同志關(guān)系也很好，由她組織的協(xié)作組既團結(jié)又有朝氣。我們又吸收安徽醫(yī)科所倪大石主任等人，力量還是很強的。但是連續(xù)三年的分離工作，結(jié)果都是似是而非：用對流免疫電泳檢查，今天有了結(jié)果，明天又沒有了；用免疫熒光檢查姬鼠的培養(yǎng)細(xì)胞也非常困難，主要是幾天也做不成一片好的細(xì)胞片來，而且經(jīng)常因孵箱溫度突然升高，細(xì)胞全部脫落，無法檢查；小廖摸索的ELISA也還不好用。每天從疫區(qū)捕捉來的黑線姬鼠有上百頭，而每天用做組織細(xì)胞培養(yǎng)的鼠不過20頭（每個鼠肺組織消化成細(xì)胞，單獨培養(yǎng)，非常繁瑣、復(fù)雜），因而在動物室里飼養(yǎng)了多批從疫區(qū)捕捉來的黑線姬鼠等待培養(yǎng)檢測。工作真是少、慢、差、廢，大家真的感到“一籌莫展”�？磥聿唤鉀Q快速檢測的方法問題，就不易獲得有意義的結(jié)果，大家的信心和熱情也會喪失。為了順利到達“彼岸”，解決“船和橋”的問題迫在眉睫�？磥恚胪七M工作的進展，應(yīng)用切片加上免疫熒光檢測，有可能達到目的�？梢姳鶅銮衅瑱C是技術(shù)上的關(guān)鍵設(shè)施（在以前我已多次征詢過多位專家，他們認(rèn)為只要室內(nèi)溫度控制好，金華無線電廠的切片機是適用的），是當(dāng)時需要解決的“船和橋”的問題。在80年11月的一天，我單獨一人奔赴浙江金華無線電廠，去購買冰凍切片機。我國改革開放不久，百業(yè)待興，火車交通非常緊張，上午9點左右在上海上車，車廂早已擠的滿滿當(dāng)當(dāng)，幾無插足之地。我只能在車廂的連接區(qū)上身背部緊靠車門，一只腳插在席地而坐的旅客間，手里還提著一個不小的旅行包，累了再換另一只腳或手，不食、不喝、不走動也無法上廁所。就這樣整整呆了8個多小時，下來時走不了路了。在車站外面靜坐片刻，去找人力三輪車站，想讓他們把我拉到無線電廠。但正逢師傅們吃晚飯，需要等一個小時。當(dāng)時，我想金華城市不大，有一個小時，我走也可以把該廠找到。果不其然，步行不到一小時就到了該廠。辦公室的同志很熱情，安排我住在他們軽工業(yè)局的招待所里。天氣已很涼，但招待所提供的還是發(fā)了霉的草席子，室內(nèi)還保留了幾只未來得及冬眠的蚊子。旅途的辛勞和住宿條件的低劣是世空見慣的，總比住大車店、安棚強百倍。記得有幾次去內(nèi)蒙，住在保昌的一家大車店里，除了臭被、臭腳味外，還要加上跳蚤和臭蟲，叫人不得入眠。那時整個國家經(jīng)濟發(fā)展水平較低，還有很多貧困人口不得溫飽，哪有更多財力改善交通運輸和各方面的條件呢？當(dāng)然有些是人為的，本來可以做得更好些。雖然我也經(jīng)常提起過那些在其工作崗位上沒有盡責(zé)的人們，但并沒因此而使自己工作受到影響。第二天，我又到了廠部，看到了切片機，就即訂了一架，讓他們直寄丹陽衛(wèi)生防疫站。
一周時間，切片機到了，大家都不知如何使用。由小趙聯(lián)系去鎮(zhèn)江醫(yī)專參觀，目睹了他們制作切片的全過程，使我們大家心里才有了底�；氐降り�，把切片機裝好以后，我首先試用，想掌握一些經(jīng)驗，但很快被年輕的同事奪了過去，大家學(xué)習(xí)新技術(shù)（切片）的熱情可高了，不久好多同事就熟練地掌握了。
第二年春天，那就是1981年，宋老師親臨丹陽現(xiàn)場實驗室與江蘇同志一起，從疫區(qū)的黑線姬鼠肺中，撿出了很好的熒光抗原鼠肺，將1％（A1）和5％（A5）的鼠肺懸液分別接種非疫區(qū)正常黑線姬鼠，獲得了能連續(xù)傳3代的結(jié)果，從傳代的鼠肺切片中可以看到細(xì)胞核周圍葡萄樣斑點狀黃綠色熒光，這預(yù)示著病毒分離的成功，給整個工作帶來了光明前途。
那年我從山西、河南出差回京后不久，去丹陽接宋老師的班，與江蘇同志接著傳第四代，第四代的結(jié)果真令人失望和害怕：發(fā)現(xiàn)傳代鼠肺切片細(xì)胞核周圍葡萄樣的熒光不見了，而代以細(xì)小微弱的斑點。我心想，不要在我的手里給丟失了，在歷史上這種情況曾經(jīng)發(fā)生過。我馬上又看這兩代的病毒在同樣鼠上滴定肺切片的熒光結(jié)果，發(fā)現(xiàn)低稀釋度與傳代鼠的一樣，還是不好；但很慶幸高稀釋度卻一個比一個好。我很快就意識到：原來在傳第四代時，我們要求規(guī)范化操作，正確配置懸液濃度，鼠肺在天平上稱重，實際上在第四代所使用的懸液濃度比前三代要高的多；加之每20天傳一次代，傳代鼠身體會有抗體，殺死鼠放血不好，肺中瘀有大量的血，制成懸液時又好象病毒和抗體放在一起，病毒被中和了。此后的結(jié)果證明，這種推測是完全正確的。我們規(guī)定至少要100～1000倍稀釋，才用于傳代，從第五代開始直至傳到第七代，熒光出現(xiàn)很好，工作非常順利，病毒滴度也達到5～6個對數(shù)。病毒分離能否成功，病毒傳代是最好的試金石，如果能連續(xù)傳代，就是成功了。獲得出血熱病毒，這是多少年人們夢寐以求的結(jié)果啊，那個高興勁就甭提了！為了應(yīng)對醫(yī)科院組織的是否真的分離到病毒可靠性檢查，我們將傳代鼠肺進行大量切片，以備用于雙盲血清的檢測。我們只用 一小葉傳代鼠肺，就切了350多張，這是年輕同志輪流進行的。在切片過程中，有一事想起來挺有趣：當(dāng)時正逢1982年15屆世界杯預(yù)選賽，中國隊對科威特，我同意晚上先看足球，切片，看完了再說。晚上8點，大家就圍坐在站里為我們提供的一架黑白電視機前面觀看，都希望中國隊能勝。但不巧，上半場中國隊被灌進去了2球，有的同志生氣了，不愿看了，主動提早上了班；下半場，中國隊卻又以4：2反敗為勝，打出了志氣，打出了精神，大家真是高興。比賽完了后，許多同事主動去接班，并告許那同事比賽最終結(jié)果。那同事一方面可惜自己沒有看到，另一方面依然感到十分欣慰！他與少數(shù)同事直把肺組織全部切完，直至凌晨3~4點鐘，他們不想睡覺，很激動，因為足球贏了受到鼓舞！可見競技體育對人們精神的影響。
為了證明實驗結(jié)果可重復(fù)性、可靠性，我們又重新從新捕獲的第九號黑線姬鼠中分離到了A9株病毒，只傳三代陽性率達100％。此株病毒后被WHO出血熱病毒參考中心收錄，作為中國的代表株
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